MLPA (multiplex ligation-dependent probe amplification)

A multiplex PCR egy olyan változata, amely lehetőséget ad arra, hogy egyetlen fluorescensen jelölt primer párral több DNS targettet felamplifikáljunk. Az MLPA segítségével vizsgálni tudjuk kópia szám változást (CNV, copy number variation) amely nagyon sok betegség hátterébe áll (pl: DMD/BDD, SMA, Parkinson kór, stb). Az MLPA semi-kvantitativ módszer, aminek segítségével nagy számú DNS szekvencia relatív kópia szám változását tudjuk egyszerre vizsgálni. Az MLPA alapja, hogy egyetlen fluorescens primer pár segítségével közel 60 prob amplifikációja lehetséges, minden egyes probe specifikusan egy egy DNS szekvenciat ismer fel, amely körülbelül 60 bázispár hosszú. Minden egyes probe 2 oligoból áll, amely a target szekvencián egymáshoz nagyon közel (egy bázispár távolságra) hibridizálodnak, annak érdekében, hogy utána probbá ligálodhatjanak. Minde egyes probe amplicon mérete egyedi (150-300 bp között változnak). Ezek az amplikon aztan a fluorescens primer párral amplifikálhatóak es kapilláris elekrtoforezissal elválaszthatóak.

1. ábra: MLPA reakció folyamatábrája és tipikus elektroferogramja