TSMS (True Single Molecule Sequencing: Valódi egymolekulás szekvenálás)

A módszer Heliscope készüléken működik és amplifikáció nélkül is akár egyetlen DNS molekulát is képes szekvenálni. A DNS-t először 100-200 bp-os darabokra hasítják és 94°C-on denaturálják. Az egyszálú fragmentumokhoz adapter DNS-molekulákkal fluoreszcensen jelölt poli-A farkakat kötnek. A DNS-darabokat egy kamra felületéhez kötik, amihez hatalmas sűrűségben (100 millió/cm2) oligo-T-ket kapcsoltak, és ehhez hibridizáltatva lehet a fragmentumokat a poli-A farkakkal a felszínhez rögzíteni.

A kamrát a szekvenálás során lézerrel gerjesztik. Ennek során azok a pontok fognak jelet adni, ahová sikeresen hibridizáltak a DNS-darabok (a detektor feltérképezi, hogy hol vannak a szekvenálásra alkalmas pontok). Ezt követően lehasítják, és lemossák a fluoreszcens molekulákat a felszínről, majd megkezdik a szintézist. A reakcióhoz DNS-polimeráz és fluoreszcensen jelölt dNTP-k szükségesek, primerként az oligo-T szolgál. A piroszekvenáláshoz hasonlóan itt egyszerre csak egyféle nukleotidot adnak a rendszerhez (pl. dGTP), ami a poli-A farok utáni első citozinnal párosodni fog. Gerjesztés hatására azok a szálak fognak világítani, ahova az adott nukleotid beépült. Majd lemossák a felszínt, és egy másik jelölt nukleotidot adnak. A négyféle nukleotidot egymást követve, meghatározott sorrendben adják a felszínhez. Minden lépés végén csak azok a szálak világítanak, ahová beépült az éppen aktuális dNTP. A készülék minden egyes lépésben egy fényképet készít a lemezről. A módszerrel naponta 1 milliárd bázist is képes szekvenálni, de hibaaránya magas (0,5%).