SMRT (Single Molecule Real-time: Egymolekulás valósidejű) szekvenálás

2011-ben fejlesztette ki egy amerikai cég a SMRT készüléket. Ezzel a módszerrel a humán genomot akár 15 perc alatt meg lehet szekvenálni kb. 100 dollárból. Ilyen készülékből jelenleg kb. 10 darab üzemel a világon. 1,5-2,9 kbp hosszúságú szakaszokkal dolgoznak, ami által pontosabb szekvencia meghatározás érhető el.

A reakciók apró, 'egymolekulás' kamrákban zajlanak, a DNS szintézis pedig fluoreszcensen jelölt nukleotidokkal történik. Ez a jelölés abban különbözik az eddig leírtaktól, hogy a festéket nem a bázisra, hanem a foszfátcsoportra rakják, amely a nukleotid beépüléskor lehasad a pirofoszfáttal együtt. A leváló fluoreszcens pirofoszfátot egy nanofotonikus vizualizáló kamra detektálja. Egy-egy kamrában 20 zeptoliter (20-21) mintát lehet érzékelni. Minden kamra aljára egyetlen DNS-polimeráz van rögzítve, ami a szintézist végzi.

A módszer igazi erejét az adja, hogy egy lemezen több ezer ilyen kamrácska található, ezért hosszú DNS-szálakkal, nagyon nagyszámú minta szekvenálható meg párhuzamosan. Mint minden szintézisen alapuló szekvenáló technikánál, itt is a homopolimerek pontos meghatározásakor akadnak nehézségek, ugyanis ebben az esetben csak a fluoreszcencia intenzitásbeli különbségeire lehet hagyatkozni.