XVI./ 3.3.5. Hibridizációs (Blot) technológiák








fontos

XVI./ 3.3.5. Hibridizációs (Blot) technológiák

XVI./ 3.3.5.1. Southern blot

A Southern blot segítségével a vizsgált DNS mintából specifikus nagyobb méretű DNS szakaszok mutathatóak ki. A Southern blot vizsgálat során a DNS szakaszok méret szerinti elválasztását agaróz gélelektroforézis teszi lehetővé, majd ezek a szétválasztott termékek egy nitrocellulóz membránra kerülnek. A membránon az adott DNS szakaszra specifikus próbákkal jelölik meg őket.

image
1. ábra: Southern blot vizsgálat folyamatábrája (https://www.mun.ca/biology/scarr/Gr12-18.html)




fontos

XVI./ 3.3.5.2. Northern blot

RNS kimutatására alkalmas módszer. Southern blothoz hasonló. Az RNS-t formaldehid-tartalmú agaróz gélben futtatják, ahol a formaldehid hatására az RNS denaturálódik és a másodlagos kötései felbomlanak, így kinyújtott alakban, méretüknek megfelelően vándorolnak a gélben. Az így szeparált RNS-eket membránra viszik, majd a vizsgálandó RNS-re specifikus radioaktív próbával hibridizálják. Az RNS-ek jelenlétét és mennyiségét autoradiográfiával detektálják. 

XVI./ 3.3.5.3. Western blot

A Westren blot fehérjék kimutatására alkalmas módszer. Hasonlóan az előző blot eljárásokhoz a vizsgálandó mintákból izolált denaturált egyenlő mennyiségű proteineket a gélen méretük alapján elválasztjuk. Ezt követően egy nitrocellulóz vagy PVDF membránra kötjük. A proteinek expresszióját specifikus antitestekkel határozzuk meg. (A metodika elve nagyon hasonlít a korábban ismertetett Southern és northern blot technikákhoz.)

image
2. ábra: Fehérjék detektálása Western blottal
Utolsó módosítás: 2019. February 4., Monday, 13:24